荧光定量PCR试剂盒-Taqman探针法

新葡3522新地址(中国)官网-Best App Store

中文English

Tel: 021-57652529

Mb: 13381606441

Mail: sales@rfunite.com

中文English

荧光定量PCR试剂盒-Taqman探针法

产品中心 > PCR_RT-PCR > 荧光定量PCR试剂盒-Taqman探针法

荧光定量PCR试剂盒-Taqman探针法

荧光定量PCR试剂盒-Taqman探针法

荧光定量PCR试剂盒-Taqman探针法
独特的PCR优化体系,使2× Real PCR EasyTM Mix-Taqman具有更强的兼容性。
热启动Foregene Taq Polymerase,具有更高的扩增效率、更高的扩增灵敏度、更高的扩增特异性。
2× Real PCR EasyTM Mix-Taqman使用Foregene优化的独特体系,提高sequence-specific probe检测的灵敏度和特异性。
本产品附带有ROX内参染料,可用于消除信号本底及孔间信号误差,方便客户用于不同型号定量PCR仪使用。 

试剂盒内容

2× Real PCR EasyTM Mix-Taqman:包含福际生物特别改造的热启动Taq DNA Polymerase、MgCl2、优化配比的dNTPs、反应缓冲液、PCR反应增强剂、优化剂以及稳定剂等。PCR反应时,只需将适当的裂解混合液、引物、DNase-ddH2O添加到2× Real PCR EasyTM Mix-Taqman中即可用于PCR反应。

ROX Reference Dye:一般用于ABI、Stratagene等公司的Real Time PCR扩增仪上,用于调整PCR加样误差所引起的 PCR管与管之间的差异。不同仪器所需ROX Reference Dye浓度不同,用户可以根据仪器的推荐浓度添加。

DNase-Free ddH2O:超纯水,用于PCR反应。

试剂盒原理

PCR扩增时在加入一对引物的同时加入一个特异性的荧光探针,该探针为一寡核苷酸,两端分别标记一个报告荧光基团和一个淬灭荧光基团。探针完整时,报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收;PCR扩增时,Taq酶的5'-3'外切酶活性将探针酶切降解,使报告荧光基团和淬灭荧光基团分离,荧光监测系统可接收到荧光信号,即每扩增一条DNA链,就有一个荧光分子形成,实现了荧光信号的累积与PCR产物形成完全同步。再通过实时监测整个PCR进程荧光信号的积累,与标准曲线对比进行定量分析。


Real Time PCR引物设计原则 

Forward Primer和Reverse Primer

进行Real TimePCR,引物设计非常重要。引物关系到PCR扩增的特异性、高效性等,可以参照以下原则进行引物设计:

u  引物长度:18-30bp。

u  GC含量:40-60%。

u  Tm值:引物设计软件,如Primer 5,可以给出引物的Tm值。上下游引物的Tm值应    尽量接近。也可以使用Tm计算公式:Tm=4℃(G+C)+2℃(A+T)。进行PCR时,一般选择低于引物Tm值5℃的温度作为退火温度(相应的提高退火温度可以增加PCR反应的特异性)。

u  引物及PCR产物:

v  设计引物PCR扩增产物长度最好在100-150bp。

v  应尽量避开在模板的二级结构区域设计引物。

v  避免上下游引物3’端之间形成2个或2个以上的互补碱基。

v  引物3’端碱基不能存在多余3个连续的G或C。

v  引物自身不能存在互补结构,否则会形成发夹结构,影响PCR扩增。

v  引物序列中ATCG应尽量分布均匀,3’端碱基避免为T。

Probe

探针选择要保守,引物选择要保守,因此必须找一段100-200bp相对要保守的片段来设计引物与探针。即real-time PCR的扩增片段是50bp-150bp。当找不到150bp的保守片段时,必须确保探针的片段是保守的。一般按照以下原则进行Probe的设计:

u  探针位置尽可能地靠近上游引物。

u  探针长度应在15-45bp(最好是20-30bp),以保证结合特异性。

u  检测探针的DNA折叠和二级结构。

u  Tm值在65-70℃,通常比引物TM值高5-10℃(至少要5℃),GC含量在40%-70%。

u  探针的5’端应避免使用G鸟嘌呤——因为5’G会有淬灭作用,而且即使是被切割下来还会存在淬灭作用。

u  整条探针中,碱基C的含量要明显高于G的含量——G含量高会降低反应效率,这时就应选择配对的另一条链作为探针。

u  为确保引物探针的特异性,最好将设计好的序列在blast中核实一次,如果发现有非特异性互补区,建议重新设计引物探针。

姓名
电话号码
电子邮箱
公司名称
地址
留言*
 
验证码
提交
荧光定量PCR试剂盒-Taqman探针法
XML 地图